atp荧光检测仪检测原理 常用atp荧光检测仪有3m lm1荧光检测仪 海净纳plus v2荧光检测仪 龟甲万pd-30荧光检测仪 纽勤atp荧光检测仪9902 海净纳ensure大肠杆菌荧光检测仪 国产atp荧光检测仪等都是采用以下原理
能催化荧光素氧化并产生生物光的一类酶被称为荧光素酶(luciferase)。
荧光素酶的种类很多,其中包括:虫荧光素酶,细菌荧光素酶,其他荧光素酶等,
现在研究和应用多的是萤火虫荧光素酶,比如北美萤火虫荧光素酶、日本萤火
虫荧光素酶、欧洲萤火虫荧光素酶、北京萤火虫荧光素酶等。目前,萤火虫荧光
素酶的发光体系的研究主要是来自北美萤火虫,而国内生产的荧光素酶大部分也
是通过克隆北美荧光素酶基因方法获取的。虽然各种荧光素酶结构不同,但其差
别不大,具有同源性。其中以北美萤火虫荧光素酶为例对其基本特征进行描述:
北美萤火虫荧光素酶是由单一多肽链组成的,含 551 个氨基酸,不含辅助因子
并且大部分氨基酸是非极性氨基酸,分子量约 62kd,等电点是 6.24,在空间结
构中含有两对二硫键,并且有两个 trp,它的大吸收值为 562nm。具体蛋白
结构见下图:
3萤火虫荧光素酶催化发光是在 atp、荧光素和 mg2+存在下发出黄绿色荧
光的。一般的多数科学家认为荧光素酶作为催化剂催化的是 d-荧光素,d-荧光
素氧化发光而且在一定条件下荧光的发射强度直接与 atp 的浓度呈正相关。其
化学反应方程式为:
luciferin+atp+o2=oxyluciferin+amp+ppi+co2+light
反应过程先是荧光素酶与荧光素结合,然后借高能化合物 atp 提供的能量,
形成具有高活性的复合物,此复合物与氧气反应形成过氧化物后,裂解而形成激
发态物质。荧光素的(lh2)活性中心首先与荧光素酶结合形成 e-lh2。然后再
与 atp 作用产生焦磷酸,后发出荧光:
形成的过氧化物可能是二氧丁环酮,其裂解反应生成激发态产物氧化荧光
素,激发态的氧化荧光素发射光子回到基态。这一反应简化为:
42
e-lh +atp-mg +o p(l=o)+e-amp+co +ppi+h 2 2 2 υ
具体的化学反应过程如下
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